ELISA pre syfilis: metóda na analýzu, dešifrovanie príčin falošných pozitívnych výsledkov

Napájanie

Zoznam štandardných diagnostických opatrení používaných na infekčné ochorenia zahŕňa enzýmovú imunoanalýzu. Ak je IFA pre syfilis pozitívny, okamžite sa nepokoja.

Pozrime sa podrobnejšie na charakteristiky tejto metodológie výskumu a na princípe dešifrovania výsledkov získaných u rôznych kategórií pacientov.

Podstata štúdie

Imunoenzymatická analýza je jednou z najbežnejších metód diagnostiky infekčných ochorení. Patrí do kategórie treponemálnych testov, to znamená, že s pomocou je možné zistiť prítomnosť príčinného pôvodcu syfilisu - bledého treponému v tele pacienta.

Metódou ELISA sa deteguje syfilis detekciou protilátok proti treponému. Sú obsiahnuté v pacientovej krvi a ich druh a množstvo závisia od štádia a formy ochorenia, čo umožňuje získať dôležité informácie o súčasnom stave ľudského zdravia.

Táto metóda sa používa aj na diagnostiku iných pohlavných a infekčných ochorení, najmä autoimunitných, parazitických, systémových a tak ďalej.

Výhody a nevýhody

Test ELISA sa často predpisuje na podozrenie na syfilis alebo iné infekčné ochorenia. To je spôsobené tým, že analýza môže určiť presný typ a stupeň ochorenia a jeho spoľahlivosť je udržiavaná na vysokej úrovni - pravdepodobnosť chyby pre výsledkov niekoľkých štúdií je iba 1%, primárna IFA s presnosťou 90%.

Použitie kvalitných činidiel a moderného vybavenia umožňuje maximalizovať presnosť indikátorov.

Vo všeobecnosti sú výhody metódy:

  1. Vysoká presnosť výsledku. Pravdepodobnosť získania nepravdivých údajov je veľmi malá.
  2. Minimalizácia ľudského faktora vplyvu. Moderné zariadenie na vykonávanie metódy ELISA vylučuje vplyv osoby na výsledky výskumu v dôsledku automatizácie procesu.
  3. Identifikácia špecifických protilátok. Nie je možné zameniť antigény jedného druhu s inými druhmi, preto analýza ukazuje presný výsledok pre konkrétnu diagnózu.
  4. Stanovenie najmenších odchýlok od normy. Dokonca aj najzávažnejšia koncentrácia patologických látok nebude ponechaná bez pozornosti.

Nezabudnite na slabé stránky tejto metódy. IFA má tieto nevýhody:

  1. Vysoká cena. Vysoké náklady sú spôsobené mnohými faktormi, najmä potrebou dobrého vybavenia, kvalitných reagencií a odborníkov s dostatočnou úrovňou odbornej prípravy.
  2. Potreba predbežnej diagnózy. Je potrebné vedieť, ktoré antigény sa majú hľadať, pretože bez ďalších údajov nie je možné urobiť presnú diagnózu.
  3. Pravdepodobnosť falošne pozitívneho výsledku. Niektoré telesné stavy a iné faktory môžu deformovať konečné údaje.

Indikácie vedenia

Lekár môže predpísať enzýmovú imunoanalýzu na diagnostikovanie nielen syfilisu, ale aj mnohých ďalších infekčných ochorení.

Ak vezmeme do úvahy situáciu priamo s infekciou treponemom, dôvodom pre prieskum môže byť:

  • výskyt vonkajších symptómov ochorenia (chancre, syfilitická vyrážka, guma atď.);
  • významné zníženie imunity;
  • detekcia alebo podozrenie na syfilis v sexuálnom partnerovi, príbuzných a rodinných príslušníkov;
  • pozitívna reakcia v iných testoch;
  • identifikácia iných ochorení, ktoré môžu byť spojené so syfilisom;
  • osobné prianie osoby, ktorá má byť vyšetrená.

Metódy vedenia

ELISA sa môže vykonať rôznymi spôsobmi. V každom konkrétnom prípade sa zvolí najvhodnejší variant.

Po prvé, existuje rozdelenie metód na:

  1. Kvalitatívne. V tele pacienta je infekcia alebo vírus.
  2. Kvantitatívne. Určuje koncentráciu protilátok proti patogénnemu činidlu v ľudskom tele, čo indikuje stupeň a intenzitu ochorenia.

Existuje tiež klasifikácia metód ELISA podľa princípu reprodukcie potrebnej reakcie.

K dispozícii sú tri možnosti:

  1. rovno. Označené protilátky sa zavádzajú do dodaných krvných vzoriek.
  2. Nepriamo s antigénmi. Predtým sa sorbované antigény umiestnili do polystyrénových doštičkových buniek na ELISA. Potom sa k nim pridajú protilátky vírusov, čo vyvoláva tvorbu imunitných komplexov potrebných na ďalšie vyhodnotenie výsledkov.
  3. Nepriamo s protilátkami. V prípade pohlavných chorôb sa táto metóda často používa. Zahŕňa predbežnú sorpciu protilátok, až potom sa na platničku pridajú antigény.

Pravidlá príjmu materiálu

Aby sa znížilo riziko získania nespoľahlivých výsledkov, je potrebné správne dodať krv na analýzu.

Pred absolvovaním testu ELISA musíte dodržiavať určité obmedzenia:

  • vyhnúť sa intenzívnemu fyzickému a emočnému stresu;
  • zdržať sa fajčenia a pitia alkoholu najmenej 1 až 3 dni;
  • na niekoľko dní musíte prejsť na správnu výživu;
  • odporúča ženám, aby kontrolovali fázu menštruačného cyklu, pretože hormóny môžu deformovať výsledky;
  • posledné jedlo by malo byť 8 až 10 hodín pred odberom krvi;
  • Počas 10 dní sa liečba vylúči, čo môže ovplyvniť výsledky štúdie.

Pre IFA sa užíva venózna krv z ulnárnej žily, musí sa užívať ráno na prázdny žalúdok. Vo všeobecnosti sa uplatňujú štandardné pravidlá prípravy na odber žilovej krvi. V závislosti od prítomnosti choroby, ktorá sa testuje, sa môžu zaviesť ďalšie požiadavky na predbežnú prípravu pacienta.

Spôsob vedenia

Pokyny na vykonanie testu ELISA sú pomerne jednoduché:

  1. Pacient odoberie krv z žily.
  2. Získaný materiál sa pripraví a rozdelí na vzorky na špeciálnej palete jemného pletiva.
  3. Antigény sa zmiešajú s protilátkami podľa zvolenej metódy.
  4. Reakcia sa hodnotí. Vzorky sa porovnávajú s kontrolnými vzorkami, vykonáva sa kvalitatívne a kvantitatívne vyhodnotenie výsledkov.
  5. Údaje sa zaznamenávajú do špeciálnej tabuľky s použitím kvantitatívnych indikátorov (celkové protilátky).
  6. Ošetrujúci lekár rozlíšil výsledky. V prípade potreby je predpísaná vhodná liečba.

Po vykonaní prieskumov pacienta sa vydá dokument s výsledkami. Má formu tabuľky s príslušnými označeniami proti každému typu imunoglobulínu v priesečníku s názvom infekčných ochorení.

odpis

Iba špecialista môže inteligentne dešifrovať výsledky testov. Nezávisle ťažko pochopiteľné, napríklad, to znamená, že výsledok ELISA k = 1 4. syfilis tiež môže nastať rôznymi spôsobmi, čo má vplyv aj na konečné údaje.

Výsledky ukazujú 3 typy imunoglobulínov:

  1. IgM. Umožnite určiť termín infekcie syfilisom. Pozitívny výsledok naznačuje exacerbáciu ochorenia. Ich neprítomnosť môže naznačovať remisiu chronických patologických stavov alebo latentnú formu ochorenia.
  2. IgA. Označuje chorobu, od okamihu infekcie, ktorá uplynula viac ako mesiac. Je to tiež znak akútnej fázy ochorenia, a to ako s normálnymi patologickými stavmi, tak s negatívnymi chronickými ochoreniami.
  3. IgG. Je to znamenie špičkového obdobia ochorenia, teda jeho zhoršenia. So syfilisom sa po liečbe objaví pozitívna reakcia. V niektorých typoch ochorení môže byť znakom vyvinutej imunity.

Tieto látky sú produkované v tele v určitej sekvencii, čo je ďalší príznak tejto choroby. Pri kvalitatívnych testoch sa stanovuje iba prítomnosť imunoglobulínov v krvi každého typu.

To sa odráža v zmene farby materiálov zahrnutých do analýzy. Kvantitatívne ukazovatele sú pomocné, presnejšie opisujú situáciu. Pomer antigénov a protilátok indikuje závažnosť ochorenia a intenzitu odozvy organizmu.

Čo robiť

Ak má pacient syfilis, vždy sa zisťuje pozitívna ELISA a v takejto štúdii nie je možné pozorovať prítomnosť treponémov. Nezúfajte, choroba je dobre liečiteľná, najmä v počiatočných štádiách.

Čo musíte urobiť s pozitívnymi výsledkami testov:

  • podľa lekárskeho testu vykonajte ďalšie testy;
  • prejsť priebeh antibiotickej liečby podľa zvoleného schémy;
  • priame úsilie o posilnenie imunity;
  • nahlásiť túto chorobu vášmu sexuálnemu partnerovi;
  • v budúcnosti pravidelne absolvujú preventívnu diagnostiku až do vyradenia z registra v nemocnici (po piatich rokoch pri neprítomnosti pozitívnych výsledkov testov).

Nie je potrebné odložiť ošetrovateľstvo na zoznam chorých a obávať sa zverejnenia výsledkov. Diagnóza je šifrovaná a zostáva tajomstvom, iba ak existuje hrozba infekcie iných ľudí, je potrebné hlásiť problém príbuzným a sexuálnemu partnerovi, aby prešli požadovanými vyšetreniami.

Falošný pozitívny výsledok a jeho príčiny

Niekedy je výsledok iných testov a IFA falošne pozitívny na syfilis. Preto sa odporúča vykonať 2 - 3 pomocné metódy a po chvíli opakovať enzýmovú imunoanalýzu.

Takéto nepresnosti sú zriedkavé, sú spôsobené hlavne týmito faktormi:

  • tehotenstva;
  • chronické choroby;
  • nedávne očkovanie;
  • poranenia.

Falošne pozitívne výsledky sú rozdelené na akútne a chronické, v závislosti od povahy faktora, ktorý ich vyvolal.

Diagnostika ELISA: akú je podstata, definícia protilátok, ako postupovať a aké ochorenia sú účinné?

ELISA (ELISA - angličtina) vstúpila do života praktickej medicíny ešte niekde v 60. rokoch minulého storočia. Jeho pôvodnou úlohou bol histologický výskum na vedecké účely, ktorý zodpovedal vyhľadávaniu a identifikácii antigénnej štruktúry buniek živého organizmu.

Metóda ELISA je založená na interakcii špecifických protilátok (AT) a príbuzných antigénov (AH) s tvorbou komplexu "antigén-protilátka", ktorý sa zisťuje pomocou enzýmu. Táto skutočnosť viedla vedcov k myšlienke, že metóda môže byť použitá na diagnostické účely na identifikáciu špecifických imunoglobulínov rôznych tried zapojených do imunitnej odpovede na konkrétnu infekciu. A bol to prelom v klinickej laboratórnej diagnostike!

Metóda sa aktívne používala až na začiatku 80. rokov a potom najmä v špecializovaných inštitúciách. Prvé imunoenzymatické analyzátory boli vybavené centier a krvné transfúzie stanicu, infekčných a pohlavných nemocníc, ako sa narodil na africkom kontinente, ktorá sa objavila na obzore tu a tam a potom sa pripojil k "starej" infekcie nadštandardné AIDS vyžadujú okamžité diagnostické opatrenia a snažiť Lekárske prípravky ovplyvňujúce ho.

Rozsah metódy ELISA

Možnosti enzýmovej imunoanalýzy sú naozaj rozsiahle. Teraz je ťažké si predstaviť, ako sa dá urobiť bez takýchto štúdií, ktoré sa uplatňujú doslova vo všetkých odboroch medicíny. Zdá sa, čo môže IFA robiť v onkológii? Ukáže sa, možno. A veľa. Schopnosť analyzovať detekciu markerov charakteristických pre určité typy malígnych novotvarov je základom včasnej detekcie nádoru, keď iným spôsobom ešte nie je určená kvôli jeho malej veľkosti.

Moderné klinické laboratórne diagnostika (CDL), s výnimkou nádorových markerov, značnú pole panely pre test ELISA, a ich použitie na diagnostiku rôznych patologických stavov (infekčné procesy, hormonálne poruchy) a monitorovanie farmaceutické terapeutické zlúčeniny na stanovenie ich účinkov na tele pacienta a, mimochodom, nie je len človek. V súčasnej dobe imunosorbent je široko používaný vo veterinárnej služby, pretože "naše menšie bratia", sú tiež predmetom mnohých chorôb, z ktorých občas veľmi veľa utrpenia.

Týmto spôsobom, Test ELISA vďaka svojej citlivosti a špecifickosti podľa vzorky krvi odobranej z žily môže určiť:

  • Hormonálny stav (hormóny štítnej žľazy a nadobličiek, pohlavné hormóny);
  • Prítomnosť vírusových a bakteriálnych infekcií (HIV, hepatitída B a C, Chlamydia, syfilis, močovina a mykoplazmózy, herpes a TORCH-infekcie a mnoho ďalších ochorení, spôsobených patogénnymi mikroorganizmami);
  • Stopy vitálnej aktivity mikroorganizmov, ktoré spôsobili infekčný proces, ktorý skončil šťastne a prešiel do štádia tvorby imunitnej odpovede na tento patogén. Také stopy, teda protilátky, v mnohých prípadoch zostávajú cirkulujúce v krvi po celý život, než chrániť osoby pred opätovnou infekciou.

Aká je podstata metódy ELISA?

Imunoenzýmová metóda umožňuje určiť nielen prítomnosť samotného patogénu (kvalitatívnu analýzu), ale aj jeho kvantitatívny obsah v krvnom sére pacienta.

Dávka vírusu alebo baktérií významne ovplyvňuje priebeh infekčného procesu a jeho výsledok, preto kvantitatívna analýza nie je poslednou úlohou v diagnostike a liečbe ochorení v rôznych formách a štádiách.

Avšak s vedomím, Immuno Research ako metóda ELISA, nemáme ani premýšľať, ako sa mu podarilo pokryť tak široké spektrum mikroorganizmov, ktoré obývajú našu planétu, z ktorých mnohé sú priame ohrozenie zdravia a života ľudí a zvierat. Ale skutočnosť, že IFA má veľa možností (non-konkurenčné a konkurencieschopných - priamych i nepriamych), z ktorých každá rieši problém, a tým umožňuje cielené vyhľadávanie.

K identifikácii imunoglobulínov akejkoľvek triedy používa konvenčné dosky s 96 jamkami polystyrén (tableta), vyznačujúci sa tým, že jamky koncentrované v pevnej fáze adsorbuje rekombinantný proteín. Uväznený v dobre sa sérové ​​protilátky v krvi alebo antigény sú, známe 'objektu, a tvorí s ním komplexnou (AG - AT), ktorý, má konjugát pevnú enzýmu, pri čítaní výsledkov zjavne zmenu farby v jamkách.

Linked ImmunoSorbent assay vykonaná na testovacie systémy definovanú špecifickosťou, vyrobené v špeciálnych laboratóriách a vybavená všetkými potrebnými reaktívne zložky. Výskum môže byť vykonávaný za použitia podložky ( "podložka") a čítacie spektrofotometre, kde väčšina z manuálnej práce s nimi spojené. O plne automatický, oslobodzujúce laboratórium z monotónna instilácie, umývanie a iné rutinnou záležitosťou, samozrejme, rýchlejšie a pohodlnejšie, ale nie všetky laboratóriá môžu dovoliť taký luxus a pokračovať v práci postarom - na poloautomatických strojoch.

Interpretácia výsledkov ELISA je v kompetencii lekára, laboratórnej diagnostiky, teda nutne brať do úvahy, a takmer všetky inherentnú vlastnosť imunochemickej reakcie dať falošne pozitívne alebo negatívne reakcie.

Video: moderné vykonávanie enzýmovej imunoanalýzy

Výsledky ELISA s použitím príkladu syfilis

Imunoenzýmová analýza je vhodná na detekciu všetkých foriem syfilisu, a navyše sa používa pri vykonávaní skríningových štúdií. Na vykonanie analýzy sa používa venózna krv pacienta, ktorá sa užíva na prázdny žalúdok. Práca používa tablety so špecifickou špecifickosťou (AT triedy A, M, G) alebo celkové protilátky.

Vzhľadom k tomu, že syfilis protilátky produkované v určitom poradí, ELISA môže ľahko odpovedať na otázku, kedy došlo k infekcii a v akej fáze je proces, a dekódovanie výsledkov môžu byť prezentované nasledovne:

  • IgM udáva trvanie infekčného procesu (môže sa vyskytnúť pri exacerbácii chronických zápalových ochorení);
  • IgA uvádza, že infekcia sa stala pred viac ako mesiacom;
  • IgG naznačujú, že infekcia je v plnom prúde alebo o nedávnej liečbe, ktorá je pri zbere anamnézy ľahko zrejmé.

Analýza pre syfilis, jamky negatívnej odpovede (a negatívnych kontrol) zostáva bezfarebný, zatiaľ čo pozitívny (ako pozitívna kontrola) sa získa jasne žltú farbu v dôsledku zmeny farby chromogénu pridanej v priebehu štúdie. No intenzita sfarbenia nie je vždy spojený s ovládacím prvkom, teda môže byť trochu svetlejšie alebo slabo žltkastý. Je otázkou, výsledky, ktoré sú zvyčajne predmetom opakované vyšetrovanie záväzným kvantitatívne opatrenia, získané na spektrofotometri, ale všeobecne platí, že farby je priamo úmerná množstvu imunitných komplexov (prepojených a AG AT).

Najimpozitívnejšou imunoanalýzou je test ELISA na HIV

HIV testovanie, možno viac než akýkoľvek iný záujem verejnosti, pretože aj keď to je nemožné povedať s istotou, že zmizlo mnoho spoločenských problémov (prostitúcia, drogovej závislosti, atď.) Bohužiaľ, HIV postihuje nielen tieto vrstvy ľudskej spoločnosti, môžete sa nakaziť za rôznych okolností, ktoré nesúvisia s sexuálnou promiskuitou alebo užívaním drog. Ak by však bola potreba testu na HIV, nemali by ste sa báť, že sa všetci okolo vás dozvedia, že navštívia takéto laboratórium. Teraz osoby infikované vírusom HIV sú chránené zákonom a pochybovatelia sa môžu obrátiť na anonymné úrady, kde môžu vyriešiť tento problém bez obáv z publicity a presvedčenia.

Imunoenzymatická metóda používaná na diagnostikovanie infekcie HIV je jednou z najdôležitejších štandardných štúdií, ktoré však vyžadujú osobitné podmienky, pretože téma je veľmi citlivá.

Test ELISA na HIV stojí za to, aby ste strávili po pohlavnom styku, transfúzii krvi, iným lekárskym postupom, a na konci inkubačného obdobia ("séronegatívne okno"), ale treba mať na pamäti, že tento časový interval nie je trvalý. Môže sa skončiť za 14 až 30 dní a môže trvať až šesť mesiacov, takže priemerná hodnota sa považuje za interval 45 až 90 dní. Pre HIV sa krv podáva rovnakým spôsobom ako u iných infekcií - od žíl až po prázdny žalúdok. Výsledky budú pripravené v závislosti od akumulácie materiálu v laboratóriu a jeho pracovného zaťaženia (od 2 do 10 dní), hoci väčšinou laboratóriá poskytujú odpoveď v ten istý deň alebo nasledujúci deň.

Čo môžete očakávať od výsledkov HIV?

ELISA na HIV detekuje protilátky proti dvom druhy vírusu: HIV-1 (viac obyčajný v Rusku a ďalších krajinách Európy a Ázie) a HIV-2 (vyskytujúce sa častejšie v západnej Afrike).

ELISA HIV úlohou je nájsť triedu na G, ktoré sú u všetkých troch testovacích systémoch, ale v neskoršej dobe, a AT triedy A a M, odhalila nová generácia rekombinantných testovací kit umožňuje vyhľadanie protilátok vo veľmi raných fázach (inkubačnej doby - "Seronegative okno"). Z testu ELISA môžete očakávať nasledujúce odpovede:

  1. Primárny pozitívny výsledok: krv sa opätovne skontroluje na skúšobnom systéme rovnakého typu, ale možno aj v inej sérii a inou osobou (laboratórny asistent);
  2. Opakovaná (+) zahŕňa nový odber krvi u pacienta so štúdiou, ako je primárna analýza;
  3. Ďalší pozitívny výsledok je predmetom referenčnej analýzy, v ktorej sa používajú vysoko špecifické testovacie zostavy (2-3 kusy);
  4. Pozitívny výsledok v obidvoch (alebo v troch) systémoch je odoslaný na imunoblotovanie (rovnaký test ELISA, ale vykonávaný jednotlivo pre testovacie súpravy s mimoriadne vysokou špecifickosťou).

Záver o infekcii HIV sa uskutočňuje iba na základe imunoblotovania. Konverzácia sa koná s infikovanou osobou v plnej dôvernosti. Zverejnenie zdravotných tajomstiev v Rusku, ako aj v iných krajinách, podlieha trestnému stíhaniu.

EIA zistí chlamýdie, cytomegalovírus a dokonca aj parazity

Testy na chlamýdie a cytomegalovírus ELISA tiež získala zvláštnu obľubu, vzhľadom na to, že umožňujú určiť dobu infekcie, štádium choroby a účinnosť lekárskych zákrokov.

Pri zavádzaní chlamýdií môžete tiež pozorovať vzhľad protilátok rôznych tried v rôznych fázach patologického stavu spôsobeného infekčným agens:

  • IgM sa môže zistiť do siedmich dní po infekcii;
  • IgA naznačuje, že infekcia v tele žije viac ako mesiac;
  • IgG potvrdzuje diagnózu chlamýdií, pomáha monitorovať liečbu a určuje jej účinnosť. Je potrebné poznamenať, že protilátky triedy G zostávajú a obiehať v tele, bez ohľadu na priechodu ochorenia, takže správna analýza dešifrovanie musí brať do úvahy referenčnej hodnoty (normy), ktoré, mimochodom, pre každú CDL jej: s ohľadom na stupeň testovacieho systému a špecifickosť reakčných činidiel, ktoré sú súčasťou súboru. Hodnoty normy spadajú do formy vedľa výsledku ELISA.

Čo sa týka cytomegalovírusu (CMV), tu je trochu iný: protilátky triedy M sa objaví asi mesiac a pol, to znamená, pozitívny výsledok (IgM +) sa stáva vo fáze s primárnej infekcie alebo reaktivácie latentnej infekcie, a zostáva tak od 4 mesiacov až šesť mesiacov.

Prítomnosť triedy G je charakteristická pre nástup primárnej akútnej infekcie alebo reinfekcie. Analýza zistila, že by vírus prebieha, ale informácie v akej fáze procesu infekcie - nie je. Medzitým vymedzenie norma IgG titer tiež spôsobuje ťažkosti, pretože úplne závisí na imunitnom stave jedinca, ktorý je však nastavená detekcia imunoglobulínu triedy G. S ohľadom na toto správanie protilátok v diagnostike infekcie CMV je potreba na účely posúdenia schopnosti protilátok interagovať s triedy G TSMV, potom "neutralizovať" (AT avidity). V počiatočnom štádiu ochorenia je veľmi zlá IgG sa viažu na antigény vírusu (nízka aviditou), a až potom sa začne zobrazovať aktivitu, a preto možno hovoriť o zvýšení avidity protilátok.

Algoritmus štúdií IFA s podozrením na CMV

Aké sú parazity - nestojí za rozprávanie, pretože sledujú osobu od detstva, v plnom zmysle toho slova, jed jeho život (parazity odpadové produkty sú vysoko toxické). Sú impozantnej veľkosti (hlísty a jednoducho - červov) alebo malé (améby, Trichomonas, Giardia).

Pred nástupom enzýmovej imunoanalýzy v klinickej laboratórnej diagnostike bolo veľmi ťažké nájsť parazity, teraz, ako sa hovorí: "Žiadny problém!". A to všetko preto existuje test ELISA, ktorý nájde parazit v akejkoľvek forme (cysty, larvy, vajcia alebo dospelé osoby) a v akejkoľvek časti ľudského tela nie. Aby ste to dosiahli, potrebujete len odobrať krv z žily a nájsť protilátky, ktoré telo už reagovalo na cudzie antigény.

Výhody enzýmovej imunoanalýzy možno povedať dlho a veľa, pretože táto metóda dokázala vyriešiť mnoho diagnostických problémov s použitím len venóznej krvi. Nepotrebujú dlhé očakávania, obavy a problémy s prijímaním materiálov na výskum. Navyše testovacie systémy pre test ELISA sa naďalej zlepšujú a nie je ďaleko od toho dňa, keď test poskytne 100% spoľahlivosť výsledku.

Analýza syfilis ELISA - interpretácia analýzy. Norma a odchýlky.

Ak je predpísaná analýza, poskytnite test ELISA na syfilis. Metódy laboratórnej diagnostiky. Výsledky analýzy - ako určiť rýchlosť a odchýlku. Náklady na enzýmovú imunoanalýzu.

V akých prípadoch ide o analýzu ELISA na syfilis

Spravidla na adrese v ambulancii, lekári predpisujú odovzdať rôzne analýzy. To im umožňuje identifikovať infekcie a choroby, ktoré ľudia trpia. Test ELISA alebo takzvaný enzýmový imunologický test je skvelý spôsob, ako vyhodnotiť imunitný systém tela a identifikovať prítomnosť protilátok infekciou a štádiom ochorenia.

Keď vezmeme do úvahy, že veľké množstvo parazitov preniká do ľudského tela, je žiaduce vykonať testy a skontrolovať ich každú osobu tak, aby jeden deň nedostali pozitívny výsledok pre infekciu.

Analýza umožňuje identifikovať látky a parazity, ktoré sú antigénne pre ľudské telo, a detekciu imunoglobínov. To nielen umožňuje určiť chorobu, ale diagnostikovať fázu. Výsledky analýzy ELISA sú uvedené kvantitatívne i kvalitatívne.

Kto teda má prijať tento test a čo je enzýmovo viazaný imunosorbentný test? Lekári napíšu túto analýzu, ak človek vyvine nasledujúce choroby:

  • Vyrážka na tele je alergická reakcia.
  • Vírusy - herpes, cytomegalavírus.
  • Pohlavne prenosné choroby - syfilis, trichomóniá.
  • Patológia spojená s rakovinou.
  • Neurosyfilis.

Okrem týchto ochorení je analýza určená na stanovenie hladiny hormónu v krvi. Výsledkom je hodnotenie kvality liečby. Čo je syfilis, vie s istotou každý človek, ale nepredstavuje jeho rozsah a koľko infikovaných ľudí chodí vedľa nás.

V súčasnosti je najčastejšou chorobou syfilis. Je to treponem, ktorý postihuje ľudské telo. V dôsledku toho sú ovplyvnené všetky vnútorné orgány chorých.

Penetrácia parazitov do tela spôsobuje infekciu osoby. Táto pohlavná choroba môže byť infikovaná nielen sexuálne, ale aj domácou metódou, stojí za to pamätať a dodržiavať jednoduché pravidlá prevencie.

Je to veľmi nebezpečná infekcia a často sa stáva, že sa už dlho nemôže prejaviť. Preto človek môže byť dlhoročným nositeľom a distribútorom, nevediac, že ​​je chorý.

Metóda laboratórnej diagnostiky

Medicína nezostáva stáť, moderné analýzy sa výrazne odlišujú od starých metód výskumu tela. Hoci dokonale plnili svoju úlohu, ale niekedy museli čakať týždne a mesiace. To prirodzene nebolo priaznivé pre infikovanú osobu. Aký je očakávaný výsledok bol chorý človek.

Klasické testy - detekcia syfilisov Wassermanovou metódou, Kahnova metóda začala brať svoje pozície a nahradila testami ako ELISA.

Ide o najmodernejší spôsob detekcie infekcie u ľudí. Výsledok je dešifrovaný pomocou počítača. To vám umožní presnejšie určiť pozitívny výsledok alebo negatívnu analýzu.

Počas transkripcie sa uskutočňuje vyhľadávanie protilátok proti špecifickým ochoreniam. A ako výsledok analýzy bolo možné identifikovať infekciu, keď bol výsledok pozitívny. Použitím metódy ELISA na detekciu syfilisu je implikovaná trojstupňová aplikácia imunoglobulínov:

  • G, M, A - pre diagnostiku sú najdôležitejšie.
  • Vyrábajú sa v infikovanej osobe striktne v určitom poradí.
  • Rýchlo zistite stupeň infekcie.

Výsledky EIA - norma a pozitívna analýza

Ak hovorí o analýze ELISA pre syfilis, potom je v tomto prípade ťažké povedať, že existuje norma alebo odchýlka. Výsledok je zvyčajne buď negatívny alebo pozitívny. Okrem toho existujú názvy, ktoré určujú množstvo protilátok v krvi.

Existuje veľa jemností pri dešifrovaní analýzy, ak sa ukáže pozitívny výsledok, analýza bude ešte potrebné opakovane opakovať, aby sa vylúčila metóda falošne pozitívnej reakcie.

Keďže pri dekódovaní analýzy bolo veľa jemností, výsledok môže určiť iba ošetrujúci lekár. Uveďte príklady v tabuľke, ktoré môžu byť preukázané výsledky enzýmovej imunoanalýzy:

Ifa na syfilis

Čo je metóda ELISA?

Imunoenzymatická analýza je základom diagnostiky mnohých infekcií, nielen pohlavných chorôb a syfilisov. Táto metóda je založená na stanovení protilátok v sére z pacientovej krvi odobratej z žily.

V krvi každého z nás existujú špeciálne štruktúry proteínovej povahy - protilátky, ktoré sú reprezentované rôznymi triedami.

Jedna z hlavných funkcií protilátok je viazaná na antigény a tvorba určitých komplexov, ktoré sa ťažko rozpúšťajú. Na výrobu protilátok sú zodpovedné za krvné bunky - lymfocyty.

Keď sa infekčné agens akýchkoľvek chorôb v ľudskej krvi, v reakcii na produkcii protilátok, ktoré sa prostredníctvom kontaktu s receptormi pre vytvorenie dobre definované antigény patogénu.

Takýto komplex sa nazýva kombinácia "antigénov + protilátok". A táto metóda ELISA na syfilis umožňuje registráciu jednotlivých komplexov protilátky a antigénu v syfilis treponemy v prítomnosti enzýmov a reakčných činidiel v špeciálnych etikiet.

Stanovenie takýchto ELISA komplexov metódou infekcie syfilisom bolo umožnené iba pomocou špeciálnych enzýmových zlúčenín, ktoré boli pridané do študovaného materiálu.

Vzhľadom na to, čo sa táto diagnostická metóda aktívne používa na určenie jednotlivých tried imunoglobulínov, ktoré sa objavujú na pozadí určitej infekcie.

Navyše, s enzýmovým imunotestom, nielen prítomnosťou, určuje sa kvalitatívna reakcia, ale aj kvantitatívny počet protilátok.

Takáto analýza syfilisu vám umožňuje posúdiť stav po infekcii a po liečbe sledovať dynamiku na pozadí prijatej terapie.

Testy Špecifická treponemálními sérologické sa nazývajú preto, že v týchto testoch sa používajú svetle Treponema, alebo antigény, teda antigény treponemálními pôvod.

Účelom treponemálnych testov je detekcia špecifických protilátok proti antigénnym štruktúram pôvodcu syfilisu, t.j. protilátok špecificky namierených proti samotným baktériám T.

Pallidum, a nie proti telesným tkanivám poškodeným treponémom. Špecifické anti-treponemálne protilátky triedy IgM môžu byť detegované už na konci druhého týždňa choroby.

Včasné a kvalitatívne rozpoznanie syfilitovej infekcie je v súčasnosti spojené s rozsiahlym zavedením treponemálnych testov.

Treponemálními testy sa používajú iba pre diagnózu syfilis a nepoužívajú sa na kontrolu liek, T / treponemálními účinky u niektorých pacientov môže zostať pozitívne rokov po úplnej ošetrení syfilis.

Podľa klinickej špecifity sú treponemálne testy porovnateľné s testami, ktoré nie sú treponemálne, v klinickej citlivosti sú vynikajúce.

Test ELISA alebo enzýmová imunotesta sa týka sérologických testov a je určený na detekciu a diagnostiku patologických mikroorganizmov v krvnom sére.

Prostredníctvom analýzy sa pre baktérie určujú rôzne triedy imunoglobulínov: IgM - v akútnom patologickom procese a IgG v štádiu obnovy, ktoré v niektorých prípadoch pretrvávajú počas celého života.

Pomocou imunoenzymatickej diagnostiky sa objavujú choroby rôznej etiológie:

  • Vírusové. Vírusová hepatitída, cytomegalovírus (CMV), herpes, osýpky, mumps, ovčie kiahne, leukémie T-buniek, rubeoly, chrípky, parainfluenzy, adenovírus, mononukleóza.
  • Bakteriálne. Tuberkulóza, brucelóza, salmonelóza, záškrt, infekcie Helicobacter pylori, Legionárska, čierny kašeľ. Infekcie spôsobené streptokokmi, stafylokoky, pneumokoky, meningokoky, Haemophilus influenzae - meningitídy, pneumónie, angína, šarlach, reumatická horúčka, sepsa, abscesy, pyelonefritída, otrava jedlom, a urogenitálny trakt: chlamýdie, mykoplazmy, Ureaplasma, kvapavka.
  • Infekcie spôsobené prvokmi. Amebiáza, toxoplazmóza, kryptosporidóza.
  • Parazitárne. Echinokokóza, toxokaréza, pneumokysáza.
  • Hubové. Aspergilóza, kandidóza.

Test ELISA je tiež indikovaný na diagnostiku syfilisu s potvrdením pozitívnych výsledkov metódou RV a umožňuje sledovanie účinnosti liečby v patologickom procese.

je nutné Immunoassay priradená označenie (ktorý je podozrivý z infekcie mikroorganizmami), v priebehu tehotenstva a pred operáciou pre identifikáciu nosiče rôznych baktérií.

Postup analýzy sa vykonáva ráno na prázdny žalúdok, odoberie sa materiál (krv) z žily. Výsledky diagnostickej štúdie sa pripravujú až na 10 dní.

Druhy výskumu a biomateriály na analýzu

Nasledujúce sú známe pre treponemálne testy:

  • Komplexná fixačná reakcia (Wassermanova reakcia) s treponemálnym antigénom (RSKT).
  • Fluorescenčná treponemálna protilátka (FTA). Používa sa v niekoľkých modifikáciách: RIF-200 (FTA-200); RIF-abs (FTA-abs, FTA-abs dvojité farbenie, FTA-abs IgM, RIF-abs-IgM, 19S-IgM-FTA-abs); RIFTS je reakcia imunofluorescencie s celkovou krvou.
  • Pasívna hemaglutinačná reakcia (TPGA, test na hemaglutináciu Treponema pallidum, TPHA).
  • Reakcia pasívnej aglutinácie želatínových častíc senzitizovaných antigénmi vyvolávajúceho syfilis (TPPA, test aglutinácie častíc Treponema pallidum)
  • Imunoenzýmová analýza (ELISA, Enzyme Lynced Immunosorbent Assay).
  • IHL - imunochemiluminiscenčná štúdia (IHL, Chemiluminiscence immunoassays, CLIA)
  • Reakcia imobilizácia bledo TREPON RIBT (RIT), zahraničnej literatúry TPI (Treponema pallidum znehybnenie test). V posledných rokoch sa používa čoraz zriedkavejšie a len na vedecké účely a vo výskumných laboratóriách.
  • Imunobloting (Western Blot, Line Blot). Spravidla sa používa lineárne imunoblotovanie, čo je variant enzýmovej imunoanalýzy. Používa sa v dvoch verziách: na detekciu protilátok proti IgG a IgM proti príčinnému ochoreniu syfilisu

Reakcia pasívne hemaglutinácia (PHA) a enzyme-linked imunosorbent (ELISA) pre protilátky triedy IgM, IgG a celkovo majú univerzálny význam a sú použité pre skríning, a pre potvrdenie diagnózy.

Tieto techniky sú jednoduché a dostupné vo vedení, majú vysokú reprodukovateľnosť, sú automatizované. Pri použití metódy ELISA alebo RPGA je povinnou podmienkou použitie pri opakovanej analýze rovnakého testovacieho systému ako v počiatočnom vyšetrení.

FTA (fluorescenčná protilátky proti treponemám, FTA) na základe vizualizáciu pod fluorescenčné mikroskopia komplexy antigénu s protilátkami za použitia séra proti ľudskému Ig značené fluorochrómy.

IEF metódy ELISA, imunoblotu (IB) môžu detekciu špecifických protilátok proti antigénom T. pallidum (syfilis testy sú pozitívne) od 3. týždňa po infekcii a skôr, PHA a RIBT - od 7-8 týždňov.

Z najčastejších konkrétnych treponemálními testov vo svete, v ktorom sa používa aglutináciu, nasledujúce môže byť uvedený. V TPHA (Treponema pallidum hemaglutinačný test, TPHA) mikrogemagglyutinatsii reakciu (microhemagglutination testu pre Treponema pallidum, MHA-TP) s pozitívnym výsledkom aglutináciu erytrocytov potiahnutých (ošetrené) treponemám antigénu, v prítomnosti anti-treponemálními protilátok. Použitie ako želatína alebo latexové častice nosiča v testovanom TRRA (Treponema pallidum aglutinácia) umožňuje použiť skúšku zaťaženia v prípade, že lýze erytrocytov (erytrocytov rozkladu v dôsledku deštrukcie membránach) séra niektorých pacientov, a tiež prepožičiava stabilitu činidiel.

Živé patogénne treponémie

RIT, RIBT (reakcia imobilizácie bledých treponemov)

RIF (imunofluorescenčná reakcia), RIF-abs (RIF s absorpciou), RIF-c, RIF s kapilárnou krvou z prsta a podobne.

Proteíny sa oddelili elektroforézou na polyakrylamidovom géli a preniesli sa na membrány metódou Western blot

Proteíny sa oddelili elektroforézou na polyakrylamidovom géli a preniesli sa na membrány metódou Western blot

Laboratórne testy na detekciu treponému sa nazývajú serodiagnostika. Serodiagnostika syfilisu je podmienene rozdelená do dvoch skupín:

  • Špecifické testy, ktoré poskytujú pozitívny test aj po vyliečení choroby;
  • Nešpecifické analýzy ukazujúce výsledok, ak je ochorenie v konkrétnom čase.

Aký je názov analýzy syfilisu? Výskum je rozdelený do dvoch skupín:

  • Syfilis rpga, ktorý sa dešifruje ako reakcia pasívnej aglutinácie alebo syfilisu, ktorá sa prejavuje na hemaglutinácii Treponema pallidum;
  • RIF alebo imunofluorescenčnú reakciu;
  • RIT alebo reakcia imobilizácie treponem;
  • Imunoenzymatická analýza;
  • Imunoblot pre syfilis alebo imunoblotovanie;

Diagnóza syfilis má niektoré zvláštnosti a líši sa od diagnózy iných bakteriálnych infekcií. Zložitá štruktúra a antigénové vlastnosti bledého treponému spôsobujú chyby pri interpretácii výsledkov sérologických reakcií.

Krvný test na syfilis sa ponúka pre 3 hlavné skupiny pacientov:

  1. 1 Screening a vyšetrenie skupín obyvateľstva (vrátane tehotenstva, registrácie v konzultácii žien, vstupu do práce a registrácie medknizhki a pod.).
  2. 2 Skríning v rizikových skupinách (nechránený sex s osobou infikovanou syfilisom, ľudia po nútených sexuálnych kontaktoch, HIV-infikovaní atď.).
  3. 3 Osoby s príznakmi choroby alebo osoby s podozrením na syfilitovú infekciu.

Všetky laboratórne metódy sú podmienene rozdelené na priame a nepriame.

Priame metódy

  1. 1 Identifikácia Treponema pallidum v tmavom poli (tzv. Darkfield microscopy).
  2. 2 Infekcia experimentálnych zvierat (kultivácia na laboratórnych zvieratách).
  3. 3 PCR (polymerázová reťazová reakcia).
  4. 4 DNA alebo hybridizáciou nukleových kyselín.

Nepriame metódy

Sérologické reakcie sú metódy laboratórnej diagnostiky založené na detekcii protilátok (skrátených AT) na antigény bledého treponému (skrátene AH). Majú primárny význam pre potvrdenie diagnózy.

  1. 1 Non-treponemal testy:
    • Wassermanova reakcia (RAC);
    • Mikroprecipitárová reakcia (MR, RMP) a jej analógy, ktoré sú uvedené nižšie;
    • Test rýchlych plazmových reaktánov (RPR, RPR);
    • Test s červeným toluidínom a sérom (TRUST);
    • Non-treponemal test laboratória pre štúdium sexuálne prenosných chorôb - VDRL.
  2. 2 Treponemálne testy:
    • P-imobilizácia Treponema pallidum - RIBT / RIT;
    • P-infekcia imunofluorescencie - RIF, FTA (riedenie sér RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
    • P-pasívna hemaglutinácia (RPHA, TPHA, TPHA);
    • Imunoenzýmová analýza (ELISA, EIA);
    • Imunoblotu.

Obrázok 1 - Algoritmus sérodiagnostiky syfilisu

Histomorfologické metódy

Tieto metódy sa redukujú na identifikáciu charakteristík histomorfológie syfilistických prejavov. Pozornosť sa venuje jemnosti štruktúry pevného chancre.

Diferenciačná diagnóza infekcie pomocou histológie je však veľmi zložitá. Histomorfológia sa používa pri iných laboratórnych a klinických testoch.

Na identifikáciu ochorenia sa používajú rôzne metódy a biomateriály. V počiatočných štádiách sa stanoví syfilis pomocou bakterioskopického testu.

Vzorky sa skúmajú pod mikroskopom. Zariadenie dokáže detegovať kmene patogénu.

Neskôr sa vykonajú sérologické testy. Vďaka nim sú vo vzorkách detekované antigény a protilátky proti tejto chorobe.

Metódy na určenie sexuálnej infekcie sú rozdelené do dvoch kategórií:

  • Priamy, odhaľujúci patogénny mikroorganizmus. Medzi ne patria: v tmavom poli mikroskopia, RIT-analýzu (infekcia králikov biomateriálov pre výskum), PCR - polymerázová reťazová reakcia (použiť na vyhľadanie patogénu genetických prvkov).
  • Nepriame (sérologické) môžu detegovať protilátky proti patogénu. Sú produkované imunitným systémom ako odpoveď na infekciu.

Sérologické metódy sú rozdelené do dvoch kategórií: treponemal a non-treponemal.

Non-treponemal vrátane: testu s toluidínovou červenou, RSK analýza, RPR test, krvný test rýchlou metódou RMP.

Treponemal, kombinujúci: imunoblotting, RSK-test, RIT analýzu, štúdium RIF, RPHA-test, ELISA-analýza.

Informatívnosť testov na infekciu je odlišná. Najčastejšie sú hlavné typy testov na syfilis, ktoré zahŕňajú sérologické techniky. Pacientom, ktorí potrebujú test, lekár pridelí testy individuálne.

Biomateriál pre výskum

Ak chcete identifikovať bledý treponemus - patogén, ktorý vyzerá ako špirála a spôsobuje syfilis, odoberajte vzorky:

  • žilová krv;
  • cerebrospinálna tekutina (sekrécia z miechového kanála);
  • obsah lymfatických uzlín;
  • tkanivové vredy.

Ak je potrebné vykonať testy na detekciu syfilisu, krv sa odovzdáva nielen z ulnárnej žily, ale aj z prsta. Voľba biomateriálu a metóda vyšetrovania je ovplyvnená závažnosťou priebehu infekcie a vybavením diagnostického centra.

Potvrdenie alebo vylúčenie syfilisu: anamnéza, symptómy, testy

Potvrdenie alebo vylúčenie diagnózy môže len dermatovenereolog. Urológ alebo gynekológ môže podozrievať iba na vonkajšie príznaky. A potom by mali priviesť pacienta k dermatovenerológovi na ďalšie vyšetrenie, liečbu a sledovanie.

Diagnóza "syfilisu" je založená na kombinácii nasledujúcich symptómov:

  1. O prítomnosti alebo absencii vonkajších prejavov a symptómov.
  2. Výsledky najmenej dvoch laboratórnych testov: testy bez treponemálneho (RMP, RW alebo RPR) a treponemálneho testu (RPGA alebo ELISA).
  3. Na údajoch o tom, či už bol syfilis a či už jeho liečba prebehla.

Ak príznaky pretrvávajú

Ak nie sú žiadne vonkajšie znaky


Potom sa diagnostika stáva zložitejšou. Tu sa lekári spoliehajú iba na testy a informácie o prebiehajúcej alebo predtým neliečenej liečbe.

Voľby v tomto prípade:

  • V prípade non-treponemálními (jeden z HLR / RW / RPR) a treponemálními test (TPHA / IFA) - pozitívne, vykonáva ďalšie alternatívne testovacie treponemálními (ELISA, v prípade, že prvý test bol PHA, a naopak - TPHA ak bola IFA). Ak je test negatívny, potom krv pacienta je privádzaný do expertné pracoviská a vykonať ďalšie analýzy. V prípade, že druhá treponemálními testu sa stáva pozitívna, diagnostikované ako "latentný syfilis".Takové stav môže nastať nejaký čas po ukončení liečby. Ak pacient bol vykonaný pred liečbou, na potvrdenie diagnózy, vykonať ďalší výskum na I g M. U pozitívnych výsledkov - je diagnóza potvrdená, ale výskum je stále odporúča opakovať po 2 týždňoch. S negatívnymi výsledkami je syfilis vyvrátený.
  • Ak je test non-treponemálními (HLR / RW / RPR) negatívne a treponemálními (TPHA / IFA) je pozitívny, podmienka môže byť hodnotený ako "neskoré syfilis" alebo "nedostatok syfilis" v prípade, že pacient bol už skôr v držbe plnej liečbu. Na rozlíšenie medzi týmito dvoma podmienkami sa vykoná dodatočná skúška pre IgM (ELISA I gM, RIF-Abs-IgM, Immunoblotting-IgM). Ak je k dispozícii v krvi, vložte "neskoro syfilis" a liečte. Ak nie, pacient je považovaný za zdravého.
  • V prípade, že RPR (alebo RW / VLR) je pozitívne, TPHA pozitívne a ELISA negatívne (alebo naopak: PHA "-" a IFA "+"), výsledky skúšok sú sporné, a odporúča sa poslať krv do expertné laboratória alebo vykonať alternatívne testy (IFA, imunoblotu).
  • Ak je test non-treponemálními (PMP / RW / RPR) pozitívne a treponemálními (TPHA / IFA) záporná, potom sa udržuje po dobu ďalších treponemálními testu (ELISA / TPHA). Ak dá pozitívny výsledok, krv sa odošle odbornej laboratóriu. Ak je záporná, diagnóza je vyvrátená a výsledok testu, ktorý nie je treponemálny, sa považuje za falošne pozitívny.

Klasifikácia metód laboratórnej diagnostiky

Sérologickú diagnostiku pomáha lekárovi študovať dynamiku tvorbe protilátok v organizme pacienta syfilis v skorých štádiách ochorenia, počas liečby a po jej skončení, vyriešiť problém relapsu ochorenia u pacienta alebo reinfekcie (reinfekcie), diagnózu syfilisu do hromadných ochorení.

Protilátky proti bledému treponému IgM

Prvé protilátky IgM sa začínajú rozvíjať po infekcii. Začnú sa zistiť s pomocou sérologických reakcií od druhého týždňa po infekcii.

Po 6 - 9 týždňoch choroby sa ich počet stane maximálnou. Ak nebol pacient liečený, potom protilátky zmiznú za šesť mesiacov.

IgM protilátky zmiznú po 1 až 2 mesiacoch. po liečbe skorého syfilisu po 3 až 6 mesiacoch.

- po liečbe neskorého syfilisu. Ak je ich rast zaznamenaný, je to známka recidívy syfilisu alebo indikuje opakovanú infekciu.

Molekuly IgM sú veľké a neprechádzajú cez placentu k plodu.

Protilátky proti bledému treponému IgG

Protilátky IgG imunoglobulínov sa objavujú na konci prvého mesiaca (4. týždeň) od okamihu infekcie. Ich titer je vyšší ako titer IgM. IgG pretrváva po dlhodobej liečbe.

Nešpecifické protilátky

Existuje veľa sérologických reakcií. Je to spôsobené antigénnou mnohonásobnosťou bledých treponémov.

Pacientovho krvné sérum v rôznych fázach syfilis navyše k určitej forme alebo iného ne-špecifických protilátok - aglutiníny, na komplementu, immobiliziny, protilátky, ktoré spôsobujú imunitný fluorescencie pretsipitiny a ďalšie.

Sérologické reakcie na detekciu nešpecifických protilátok majú relatívnu špecifičnosť, preto, aby sa zabránilo diagnostickým chybám, nemal by sa používať jeden, ale komplex sérologických reakcií (DAC).

Falošne pozitívne testy na syfilis

Protilátka reagin, sa vyrábajú v krvi proti kardiolipinu antigénu, zaznamenané a to nielen v syfilis, ale aj v ďalších chorôb: kollagenozah, hepatitída, ochorenie obličiek, tyreotoxikóza, nádorových ochorení, infekčných ochorení (lepra, tuberkulóza, brucelóza, malária, týfus, šarlach), tehotenstvo a menštruácia cyklov, keď sa vezme tučných jedál a alkoholu.

Charakteristickým rysom ne-treponemálnych testov je produkcia falošne pozitívnych reakcií. Je potrebné poznamenať, že počet falošne pozitívnych reakcií sa zvyšuje s vekom.

Obr. 2. Na fotografii je primárny syfilis u žien.

Sérologické testy na syfilis sú rozdelené na treponemálne a ne-treponemálne testy.

1. Ne-treponemálne testy

Ako antigén v tejto skupine testov sa používa kardiolipínový antigén. Lipidové antigény syfilisových patogénov sú najpočetnejšie.

Tvoria 1/3 suchej hmotnosti bunky. Pri použití ne-treponemálnych testov sa detegujú protilátky-reaktanty, ktoré sa produkujú proti kardiolipínovému antigénu.

Táto skupina zahŕňa reakciu fixácie komplementu (RSKard), mikroprecipitujúcu reakciu (RMP), rýchlu reakciu reakcie plazmy (RPR) atď.

Primárny skríning syfilis (skríning populácia) bola vykonaná za použitia ne-treponemálními testy, a vedie k možnosti získať kvantitatívny prevedenie umožňuje použitie týchto testov pre sledovanie účinnosti liečby.

Pozitívne výsledky non-treponemálnych testov by mali byť potvrdené treponemálnymi testami. Charakteristickým rysom ne-treponemálnych testov je produkcia falošne pozitívnych reakcií.

2. Treponemálne testy

Treponemálne testy používajú antigény treponemálneho pôvodu, izolované z kultúrneho bledého treponému. S ich pomocou sa potvrdzujú pozitívne výsledky ne-treponemálnych testov.

Do tejto skupiny patria: RSKtrep - fixácia komplementu, RIF - imunofluorescencie a jeho modifikácie, RHS, RIBT - imobilizácia reakcie bledo TREPON, TPHA - pasívne hemaglutinácia reakcie, ELISA - enzýmové imunoanalýzy.

3. Testy na syfilis s použitím rekombinantných antigénov

Antigény pre túto skupinu testov bol pripravený pomocou genetického inžinierstva, a používa sa v reakciách - TPHA a ELISA imunoblotování (IB), a imunochromatografický test.

Obr. 3. Na diagnostiku syfilis sa používa súbor sérologických testov.

Na detekciu syfilisu sa používajú ne-treponemálne testy alebo komplex sérologických reakcií (DAC). Sérologická diagnóza sa aplikuje od 5. týždňa od okamihu infekcie alebo od 2-3 týždňov po objavení pevného chancre.

Protilátky sa zisťujú prakticky u všetkých pacientov s čerstvou primárnou, sekundárnou a rekurentnou syfilídou. Sérologické reakcie sú pozitívne u 70-80% pacientov s terciárnym aktívnym syfilizom, u 50-60% pacientov s terciárnym latentným syfilisom.

Sérologické reakcie používajúce ne-treponemálne testy môžu poskytnúť falošne pozitívne výsledky.

Obr. 4. Odber krvi na analýzu syfilisu.

Ich negatívny stránkou je nemožnosť využiť na sledovanie účinnosti liečby, získanie pozitívne výsledky v spirochetosis a non-pohlavných treponematoses a získanie falošne pozitívne výsledky pre rakovinu, lepry, niektoré choroby endokrinné.

Pri vykonávaní testov za použitia treponemálními antigény treponemálními pôvod Tieto testy sú TPHA, ELISA a IFA zostávajú pozitívne rokov po syfilis liek, a v niektorých prípadoch pre život.

RIBT a RIF sú špecifickejšie pre všetky sérologické reakcie používané na diagnostikovanie syfilisu. Umožňujú rozlíšiť falošné pozitívne reakcie, identifikovať neskoré formy syfilisu, ktoré sa vyskytujú pri negatívnych reakciách.

S pomocou RIBT sú falošné pozitívne reakcie rozpoznané u tehotných žien, keď je potrebné vyriešiť problém infekcie dieťaťa.

Reakcia imobilizácie bledých treponemov (RIBT, RIT)

Podstata reakcie spočíva v tom, že protilátky v sére pacienta blokujú bledý treponém. Negatívna je reakcia pri imobilizácii až 20% patogénov, slabo pozitívna - 21 - 50%, pozitívna - 50 - 100%.

RIBT niekedy dáva falošne pozitívne výsledky. Test je zložitý a časovo náročný, je však nevyhnutný pri diferenciálnej diagnostike latentných foriem ochorenia a falošne pozitívnych výsledkov sérologických reakcií vrátane gravidných žien.

RIBT poskytuje 100% pozitívne výsledky v sekundárnej, skoršej a neskorej syfilii, v 94 - 100% prípadov - s inými formami syfilisu.

Reakcia imunofluorescencie (RIF)

Spolu s sérologických diagnostických metód detekcie svetlých treponemy (mikrobiologické diagnostika) hrá dôležitú úlohu, a to najmä počas séronegatívnych syfilis, keď sú v krvi žiadne protilátky, ale to je prvým prejavom čerstvé primárne syfilis (chancre).

Pre štúdium biologického materiálu, je oddeliteľná od povrchu pevného vredov obsah (primárna syfilitický vred) pustulárne syphilides, vlhké a erozívnou papuly, bodkované infikovaných lymfatické uzliny, cerebrospinálny mok a plodovej vody pre PCR - krv.

Najlepšou metódou na detekciu syfilistických patogénov je preskúmanie biologického materiálu v tmavom poli mikroskopu. Táto technika vám umožňuje vidieť bledý treponém v živom stave, aby ste študovali jeho štruktúrne znaky a pohyby, aby ste rozlíšili patogénne patogény od saprofytov.

Obr. 15. Analýza syfilis - mikroskopia tmavého poľa.

Obr. 16. Pri štúdiu suchých ťahov sa používa sfarbenie podľa Romanovského-Giemsy. Bledý treponém sfarbený v tomto prípade v ružovom, všetky ostatné druhy spirochaete - fialové.

Detekcia bledého treponému s mikroskopom v tmavom poli je absolútnym kritériom pre konečnú diagnózu syfilisu.

Obr. 17. Pre identifikáciu baktérií použitá imunofluorescencie (RIF) - treponemálními testu. špecifický komplex antigén-protilátka, v kombinácii so špecifickým sérom značenú fluorochrómy, fluorescenčné svetelný mikroskop osvetlenie baktérie dáva zelenkavú farbu.

Obr. 18. Príčiny syfilisu sa dajú ľahko pozorovať v škvrnach pripravených podľa Levaditiho techniky (impregnácia striebrom). Bledý treponém tmavej farby na pozadí žltej farby buniek infikovaných tkanív.

Obr. 19. Príčinou vzniku syfilisu pri viacerých zväčšeniach.

Obr. 20. Na fotografii kolónie bledý treponem. Je ťažké získať kultúru baktérií. Prakticky nerastú na umelých živných médiách. Na médiách obsahujúcich sérum koní a králikov sa kolónie objavujú 3. až 9. deň.

V tabuľke 1 sme uviedli možné výsledky analýz a ich dekódovanie. Ako je zrejmé z tabuľky, hlavnou hodnotou dekódovania je komplexné vyhodnotenie testov.

Tabuľka 1 - Dešifrovanie výsledkov sérologických reakcií (krvné testy na syfilis). Ak chcete zobraziť kliknutie na tabuľku

Hodnotenie testovacej reaktivity sa vykonáva aj krížikmi:

  1. 1 Maximálna odpoveď (prudko pozitívna skúška) sa indikuje pomocou 4 krížov.
  2. 2 Pozitívna vzorka je označená pomocou troch krížov.
  3. 3 Slabá pozitívna reakcia je indikovaná dvomi krížikmi.
  4. 4 Jeden kríž označuje pochybný a negatívny výsledok.
  5. 5 Negatívna odpoveď je označená znamienkom mínus.

Problém optimalizácie laboratórnej diagnostiky syfilisu v súčasnosti nezanikol. Moderné metódy diagnostiky, napriek túžbe vedcov priniesť diagnostiku na najvyššiu možnú citlivosť a špecifickosť, si vyžadujú kontrolnú kontrolu a individuálny prístup.

Zvláštnosťou syfilitickej infekcie je fenomén séro-rezistencie, ktorý nikdy nedostal vedecké vysvetlenie. Diagnóza sa robí po úplnom vyšetrení pacienta s epidemiologickými, klinickými, laboratórnymi metódami.

V kontexte hospodárskeho a technického rozvoja medicíny dochádza aj v rozvoji nových kritérií diagnostiky syfilisu. To všetko rýchlo, úspešne a presne liečia pacientov.

Niektorí pacienti, ktorí prichádzajú na vyšetrenie gynekológu alebo andrologovi, neposkytujú objektívne informácie o kvalite svojho sexuálneho života.

Možno je dôvodom zvyčajné rozpaky, alebo možno chybou je nedostatok informácií v oblasti pohlavne prenosných chorôb.

Kde vykonať analýzu

Výsledky testov a klinické prejavy priamo závisia od imunitnej odpovede organizmu.

Skorý syfilis

V podmienkach vybavených laboratórií a zdravotníckych stredísk môže byť stanovenie enzýmovej enzýmovej reakcie pomocou treponému pomocou metódy stanovením niekoľkých metód, ktoré sa nazývajú priame a nepriame.

Avšak tieto metódy sú založené na jednej metóde, ktorá umožňuje analýzu syfilisu pomocou ELISA. Táto skúška sa vykonáva určitým spôsobom.

Laboratórium má špeciálny doskový panel s otvormi vo forme zaoblených dutín v množstve až sto. Keď lues stanovené pomocou ELISA za použitia špeciálne pripravené zahustí na antigény syfilis v agregátmi pre túto analýzu, ktoré sú umiestnené do jamiek doštičky ELISA.

Po užití pacientovej krvi ráno na prázdny žalúdok sa sérum oddelí od krvi a umiestni sa do studní s antigénmi. V jamkách dochádza k väzbe antigénu k protilátkam.

Metóda ELISA pre syfilis je založená na väzbovej reakcii prvých stupňov imunitných zlúčenín a konjugátov so špeciálnou značkou enzýmu, ktorá je potrebná na zistenie kvality reakcie.

V tomto štádiu sa okrem enzýmu peroxidázy pridajú chromogénne farbivá na farbenie materiálu v závislosti od výsledku reakcie. Na základe zobrazených farebných jamiek v platničke sa deifreluje IFA syfilis.

V súboroch pre rôzne metódy ELISA sú pripojené tabuľky farebných schém, podľa ktorých sa určuje množstvo, hladina imunoglobulínov, protilátky z séra pacienta v 1 jednotke objemu.

Na odhad výsledku reakcie sa používa špeciálne zariadenie, spektrofotometer na vykonávanie fotometrie a odhad hustoty materiálu v jamkách v porovnaní s kontrolnými vzorkami.

Na základe hustoty je výsledok jasne stanovený pre každý patogén syfilisu v rámci noriem a patológie.

Odporúča sa použiť niekoľko testov, aj keď doba trvania štúdie k získaniu čo najpresnejších výsledkov laboratórnej diagnostiky syfilis, sexuálne prenosnú chorobu trvá o niečo dlhšie, ale stojí to za to.

Najčastejšie predkladaný krvný test na syfilis po vyšetrení je uvedený vo forme číslic, ktorého dekódovanie má toto označenie:

  • "4 +" - hovorí o ostrom pozitívnom výsledku;
  • "3+" je jednoducho pozitívny výsledok;
  • "2+" je slabo pozitívny výsledok;
  • "1+" je pochybný výsledok;
  • "-" - negatívny výsledok.

Po obdržaní výsledkov analýz s pozitívnymi údajmi však neodstraňujte okamžite, ako už bolo uvedené, nie všetky testy môžu poskytnúť úplné informácie o prítomnosti syfilisu.

Napríklad klinická analýza RW v dôsledku nedostatku špecifickosti môže poskytnúť falošne pozitívne výsledky, ak pacient trpí ďalšími ochoreniami. Ako napríklad:

  • lupus erythematosus;
  • reumatoidná artritída;
  • sklerodermia;
  • mononukleóza;
  • osýpok;
  • hepatitída;
  • srdcový záchvat;
  • malígna forma na akomkoľvek orgáne.

Tiež falošné pozitívne výsledky môžu byť zistené u úplne zdravých ľudí alebo ľudí zneužívajúcich alkohol a drogy.

Preto chcem zdôrazniť to, čo bolo povedané skôr, že je potrebné vykonať krvný test na syfilis naraz niekoľkými metódami a najlepšie pomocou treponemálneho testovania.

Dôležitú úlohu pri spoľahlivosti výsledkov analýzy krvného séra pre syfilis zohráva správna príprava na jej dodanie, ako aj výber laboratória na diagnostiku. Dnes sa takáto analýza vykonáva vo verejných aj súkromných zdravotníckych laboratóriách.

Samozrejme, že v súkromných inštitúciách bude mať táto diagnostika určitú cenu, spravidla cena analýzy závisí od zvolenej metódy a od naliehavosti výskumu. Tiež tu môžete robiť to anonymne.

Ak chcete analyzovať krv pre syfilis čo najpresnejšie, mali by ste dodržiavať niekoľko jednoduchých pravidiel:

  1. Po prvé, dať krv výlučne na prázdny žalúdok a lepšie ráno.
  2. Po druhé, v predvečer testu je prísne zakázané piť alkoholické nápoje, dokonca aj s najnižším zložením.
  3. Po tretie, okrem sére, ktorá je obvykle prevzatá z lakťovej žily, ako materiál pre laboratórne testovanie na prítomnosť syfilis, môže sa stať vypúšťacie chancre (charakteristické pre syfilis lézií) alebo defekt lymfatických uzlín.

Ak máte podozrenie, že vy alebo niekto z vašej rodiny nakazilo syfilis, ale z nejakého dôvodu robiť krvné testy, Laboratórne pacienta na syfilis nie je možné, potom primárna diagnóza, môžete použiť špeciálny rýchly test doma,

Takýto test si môžete kúpiť v akejkoľvek sieti lekární a postupovať podľa prísne dodržiavaných pokynov. Iba v tomto prípade budete môcť získať spoľahlivý výsledok.

Zvyčajne sa rýchla diagnostika syfilisov doma robí na základe krvi. Bude to trvať doslova o jednu kvapku, aby ste získali očakávaný výsledok, ktorý vás nebráni čakať (doslova pár minút).

K dispozícii sú aj súpravy na diagnostiku syfilis doma s ďalším odoslaním biologického materiálu do špecializovanej inštitúcie.

Človek by nemal ignorovať radu odborníka, a potom, čo vlastné diagnózy, sám si naordinovať liečbu, alebo naopak, vzdaj to, za predpokladu, že nemáte choroba. V každom prípade, aby ste objasnili celý obraz, je potrebné bezodkladne konzultovať s lekárom.

Enzym viazaný imunosorbentný test (ELISA) je jednou z mnohých metód sérologickej diagnostiky infekčných ochorení.

Imunosorbent (ELISA) v serodiagnosis syfilis - test protilátok triedy M, G a A (IgM, IgG, IgA) proti antigénom Treponema pallidum. Môže sa použiť test ELISA s CSF.

Zavedenie enzýmovej imunoanalýzy (ELISA) do praxe namiesto Wassermanovej reakcie a iných kardiolipínových testov významne zlepšilo kvalitu laboratórnej diagnózy syfilisu. Základnou výhodou tejto metódy je možnosť automatizácie výskumného procesu, ktorý umožňuje znížiť vplyv ľudského faktora.

1. História metódy ELISA

Hlavné princípy enzýmovej imunoanalýzy na povrchu nosiča tuhej fázy boli vyvinuté E. Engvarom a spoluautorom.

(1971), B. Van Weeman a A.

Schuurs (1971). Enzýmovo viazaný imunosorbentný test bol prvýkrát navrhnutý na diagnostiku syfilisu v roku 1975.

Visser, ktorý ocenil potenciál tohto automatizovaného testu. ELISA začala byť široko používaná v diagnostike syfilisu v osemdesiatych rokoch minulého storočia.

, keď boli vyvinuté a certifikované diagnostické testy a normalizované testovacie metódy. V ZSSR bola metóda stanovenia ELISA na diagnostiku syfilisu vyvinutá B.

V. Kotrovský (1982, 1983).

2. Princíp metódy ELISA

Imunosorbent (ELISA) mechanizmom reakcie je v blízkosti RIF (zistené rovnaké protilátky). Imunotest Výskum reakcia enzýmu sa vzťahujú k imunologické reakcie, vztiahnuté na veľmi špecifické interakcie medzi antigény Treponema pallidum protilátok syfilis pacientov.

V syfilologickej praxi sa používa nepriamy variant testu ELISA. Princíp najpoužívanejšieho nepriameho variantu reakcie je nasledujúci.

Na povrchu polystyrénovej platne sú fixované imunitné komplexy, ktoré sú tvorené interakciou protilátok pacienta so syfilisom s bledými antigénmi treponema.

Potom sa identifikujú farebnou reakciou s použitím špecifických konjugátov a príslušných substrát-chromogénnych prísad.

Postup vykonania testu je nasledovný: sérum pacienta je umiestnené na nosiči na tuhej fáze s antigénom pripojeným k nemu. Keď sú v ňom prítomné protilátky, na povrchu nosiča sa vytvorí komplex antigén-protilátka.

Na "zistenie" výsledkov reakcie sa používajú protilátky proti ľudskému Ig konjugované s enzýmovými markermi. V prípade pozitívnej reakcie sa enzým, ktorý sa pripojil k komplexu antigén-protilátka, rozkladá substrát pridávaný do systému, v dôsledku čoho sa vyvíja farebné sfarbenie s rôznou intenzitou.

Pri reakcii na stanovenie komplexu sorbovaného na pevnej fáze sa AH a AT uskutočňujú pomocou antiglobulínových protilátok značených enzýmom farebnou reakciou enzýmu so substrátom.

V reakcii sa stanovenie komplexu antigénov sorbovaných na tuhej fáze a protilátok uskutočňuje s enzýmom značenými antiglobulínovými protilátkami.

ELISA predstavuje možnosť detegovania Ig séra rôznych tried. Existujú systémy na trhu, ktoré umožňujú určiť oddelene IgM a IgG a celkové protilátky.

S rozvojom laboratórnej diagnostiky v kontexte modernizácie zdravotnej starostlivosti Ruskej federácie bola zavedená laboratórna automatizácia do praxe laboratórií, čo umožňuje štandardizovať analytické štádiá výskumu.

To pomáha zlepšiť kvalitu diagnostiky. Vďaka zavedeniu automatizácie boli použité, nové high-tech metód s vysokou senzitivitou a špecifickosťou, ako je napríklad analýza immunohemilyuminestsentny (Icha) (chemiluminiscencie immunoassay - CLIA).

Identifikujte syfilis ELISA, dôstojnosti:

  • Vysoká citlivosť metódy - viac ako 90%;
  • Schopnosť sledovať dynamiku ochorenia, porovnávajúc počet protilátok v rôznych časových intervaloch;
  • Prakticky v každej zdravotníckej inštitúcii.

Aby ste predišli riziku narušenia výsledkov počas analýzy, musíte dodržiavať pravidlá. Ak sa tak nestane, je možný falošný pozitívny test na syfilis. Ak chcete vylúčiť chyby, je potrebné:

  • Dávať krv na prázdny žalúdok;
  • Zdržať sa niekoľko dní od alkoholu, mastných jedál a fyzickej únavy;
  • Fajčiť 2 hodiny pred testom;
  • Povedzte o prijatých liekoch, o nedávnych očkovaniach o prítomnosti ochorení, o stave tehotenstva a iných dostupných okolnostiach.

Trvanie testu ELISA na syfilis závisí od pracovného zaťaženia laboratória a dostupnosti zdravotníckych pomôcok v ňom.

Imunoenzýmová analýza (skrátená metóda ELISA) je založená na špecifickej reakcii antigén-protilátka. Biologický materiál (krvné sérum pacienta, cerebrospinálna tekutina) sa zavedie do jamiek na pevnom povrchu, v ktorých sú fixované antigény bledého treponému.

Testovaný materiál sa inkubuje, potom sa protilátky, ktoré sa neviažu na antigény, premyjú (pozri obrázok 5).

Identifikácia získaného komplexu sa uskutočňuje vo fermentačnom štádiu pomocou enzýmu označeného imunitného séra. Keď nastane chemická reakcia, enzým sa sfarbia výsledné komplexy.

Intenzita farbenia závisí od množstva špecifických protilátok v krvi pacienta a fixuje sa spektrofotometrom.

Obrázok 4 - Schéma ELISA (enzýmová imunoanalýza)

Citlivosť testu ELISA je vyššia ako 95%. Táto metóda sa používa v automatickom režime pre štúdium dekretiruemyh skupín: darcov, tehotné ženy a iné pre potvrdenie diagnózy s pozitívne a falošne pozitívnych non-treponemálními testov.

Pre výskumnú manipuláciu často používa krv z žily. V určitých situáciách môže laboratórny technik odobrať vzorku na diagnostiku z prsta alebo z miechy.

Interval od dátumu doručenia až po príjem výsledkov sa môže líšiť: od jedného dňa do dvoch týždňov. Všetko bude určené typom testovania.

Pri príprave na podanie krvného testu na identifikáciu príslušného ochorenia je potrebné dodržiavať tieto odporúčania:

Začať vyšetrovanie orgánu na identifikáciu príslušnej choroby vyplýva z nešpecifických testov.

Vo väčšine prípadov lekár predpisuje odvolanie na MR. Aj keď je výsledok slabý pozitívny ("+"), pacient pokračuje v skúške - ale tentoraz vykoná špecifické testy (často RIF a RPHA).

Žiadny test nemôže poskytnúť 100% záruku, že osoba je infikovaná syfilisom.

Pozitívna analýza neznamená vždy chorobu.

To môže byť falošné s nasledujúcimi javmi:

  • Infekcia organizmu (mononukleóza, tuberkulóza).
  • Tehotenstvo.
  • Cancer.
  • Autoimunitné patológie.
  • Osoba bola predtým infikovaná syfilisom a podstúpila úspešnú liečbu.

Odošle pacientom analýzu doktora-venereológa. Súkromné ​​laboratóriá vykonávajú anonymné štúdie na syfilis na žiadosť klienta. Na vykonanie testu nepotrebujú odporúčanie lekára.

Pravidlá výskumu:

  • Krv v laboratóriu sa užíva ráno na prázdny žalúdok (jesť po procedúre). Pred testom sa môže piť len voda.
  • Dva dni pred vyšetrením je zakázané: jesť mastné potraviny a piť alkohol.
  • Krv sa odoberá z prsta alebo žily.
  • Ako dlho trvá štúdia? Zvyčajne nie viac ako jeden deň. Analýza syfilisových testov sa získa od laboratórnych asistentov alebo od zodpovedného lekára.
  • Koľko je test platný? Po 3 mesiacoch výsledky testov už nie sú platné. Odovzdajú sa znova.

Ak analýza preukáže, že test je pozitívny, je potrebné navštíviť veterinárneho lekára, ktorý predpíše ďalšie vyšetrenie na presné potvrdenie diagnózy a výber potrebného liečebného režimu.